Metodologias

As metodologias utilizadas refletem-se na sensibilidade de cada teste. Quanto mais sensível o método ou combinação de métodos usados, maior é a probabilidade de alcnçar um diagnóstico genético (gene e mutações causais) e menores os recursos gastos pelo Hospital, com novos testes e exames complementares.

Análise de fragmentos + TP-PCR

Para pesquisa de expansões de oligonucleotídios, em particular, nas ataxias dominantes (SCAs), doença de Huntington e outras por expansão de tripletos, o IBMC-CGPP assegura a análise de fragmentos e a TP-PCR) que distingue dois alelos com expansões normais do mesmo tamanho).

Esta abordagem exclui os falso negativos por grandes expansões, que pode não amplificar na na análise de fragmentos, após PCR convencional

Sequenciação de Sanger completa + MLPA

Grandes rearranjos genómicos (deleções/duplicações) não são detetáveis pela técnica standard de sequenciação ou pela pesquisa de mutações mais frequentes, usadas noutros laboratórios. Sempre que adequado, o CGPP assegura a sequenciação de todo o gene (regiões codificantes e intrónicas flanqueantes) e a pesquisa de grandes rearranjos moleculares (por MLPA), que garante uma muito maior da sensibilidade, e evita a execução de testes não orientados e desnecessários. O IBMC-CGPP não utiliza métodos de rastreio de mutações (SSCP, DHPLC, HRM, etc.), pois a sequenciação direta + MLPA (se aplicável) são o métido preferencial, acarretando a posteriori menores custos.

Sequenciação de Nova Geração (NGS)

Quando há heterogeneidade genética, a Sequenciação de Nova Geração permite a análise de múltiplos genes simultânea de múltiplos genes e regiões, de forma muito mais rápida e económica que a análise individual (simultânea ou sequencal) de cada gene.

Para cada painel de genes, asseguramos:

  • Análise genética e interpretação da informação obtida;
  • Sequenciação total das regiões codificantes e intrónicas flanqueantes, com cobertura de pelo menos 40x;
  • Confirmação por sequenciação de Sanger de todas as variantes e mutações encontradas.